Полимеразно-цепная реакция считается одним из самых точных и быстрых методов диагностики многих инфекционных заболеваний. Успешно применяется она также в криминологии для упрощения процесса идентификации преступников, с ее помощью с высокой точностью устанавливают отцовство.
Суть метода ПЦР
Каждый живой организм, в том числе бактерии и вирусы, имеют уникальные гены, входящие в структуру ДНК или РНК в определенной последовательности. Во время исследования методом ПЦР генетический материал многократно копируется под воздействием ДНК-полимеразы и специальных температурных циклов.
Существуют два основных метода полимеразно-цепной реакции:
- Классический метод — выделение генетического материала возбудителя методом электрофореза;
- ПЦР в режиме «реального времени».
Методика состоит из трех основных этапов:
- Подготовка исследуемого образца;
- Амплификация ДНК;
- Детекция (идентификация) генетического материала предполагаемого возбудителя.
Для проведения исследования ПЦР-лаборатория должна быть разделена на 3 зоны, каждый этап реакции проводится строго в предназначенном для него помещении. Каждая зона должна быть снабжена необходимым оборудованием, дозаторами, расходным материалом, защитной одеждой, используемыми только в данном помещении.
После регистрации и маркировки образцов, в кабинете пробоподготовки происходит выделение ДНК или РНК возбудителя из исследуемого материала путем воздействия определенной температуры и специальных реагентов. Затем начинается процесс амплификации – создания многочисленный копий уникального фрагмента ДНК. Он состоит из 3 основных этапов:
- Денатурация ДНК – под воздействием высокой температуры (95 градусов) двойная спираль ДНК расплетается на 2 цепочки.
- Отжиг праймеров – к окончаниям цепей ДНК присоединяются специальные синтетические соединения (праймеры), идентичные генетической информации на концах искомых фрагментов нуклеиновых кислот. Температура, нужная для присоединения праймера, индивидуальна для конкретного случая, колеблется в диапазоне от 50 до 65 гр.С.
- При помощи фермента ДНК-полимеразы при 70 – 72 градусов между двумя праймерами достраивается аналогичный участок ДНК (ампликон). В качестве «строительного материала» используются специальные вещества, добавляемые в пробирку.
Циклы амплификации повторяются несколько раз, следовательно, выделяемая ДНК многократно копируется, что упрощает процесс ее идентификации. Идентификация может проводиться визуально после проведения процедуры электрофореза продуктов амплификации в агарозном геле, либо автоматически при использовании методики реал тайм.
При исследовании методом ПЦР в режиме «реального времени» амплификация и детекция происходят одновременно в специальных приборах. Данный метод наиболее предпочтительный, так как исследование проводится в закрытых пробирках, снижается риск контаминации и, следовательно, выдачи ложно-положительных результатов.
Врачи отмечают, что анализы методом ПЦР (полимеразной цепной реакции) стали важным инструментом в диагностике различных инфекционных заболеваний. Этот метод позволяет выявлять наличие генетического материала патогенов с высокой чувствительностью и специфичностью. Специалисты подчеркивают, что ПЦР-тесты особенно полезны в случаях, когда традиционные методы диагностики могут оказаться недостаточно информативными. Например, в ранних стадиях заболевания или при низкой вирусной нагрузке. Однако врачи также предупреждают о необходимости правильной интерпретации результатов, так как ложноположительные и ложноотрицательные результаты могут привести к неправильному лечению. В целом, ПЦР-анализы значительно расширяют возможности современной медицины, позволяя быстрее и точнее ставить диагнозы.
Плюсы и минусы метода
Преимущества ПЦР-диагностики:
- Исследование занимает всего несколько часов, в отличие от длительных классических микробиологических методов;
- Высокая специфичность от 95% до 100%, т.к. искомый фрагмент ДНК уникален для каждого конкретного микроорганизма;
- Высокая чувствительность метода, обнаружить возбудителя можно, даже если в исследуемом образце он представлен всего одной клеткой;
- Идентифицировать возбудителя можно как качественным, так и количественным методом. Это очень важно при выделении условно-патогенных микроорганизмов, которые в небольшом количестве не вызывают заболевания;
- Возможность определить генотип возбудителя (гепатит С, ВИЧ-инфекция). Необходимо это для рационального лечения и прогноза возможных осложнений;
- Возможность выявить генетическую предрасположенность к болезни, тем самым предупредить ее развитие;
- Можно выделить практически любой источник инфекции, также современные методики позволяют выявить совокупную микрофлору в исследуемом образце, например, биоценоз влагалища.
Недостатки:
Читайте также:
- Возможность получения как ложноположительного, так и ложноотрицательного образца при несоблюдении правил забора образца, ошибок при проведении исследования;
- Высокая стоимость анализа.
Применение
Исследовать методом ПЦР можно практически любой образец (кровь, моча, ликвор, соскобы с цервикального канала и уретры, волосяные луковицы, сперма и т.д.). Широко используется данная методика для диагностики ЗППП (гонорея, хламидиоз, уреаплазмоз, микоплазмоз, трихомониаз). С ее помощью можно выявить возбудителей туберкулеза, дифтерии, пневмонии, вирусных гепатитов, ВИЧ-инфекции, токсоплазмоза, цитомегаловирусной и герпетической инфекции, сальмонеллеза и др.
Применяется полимеразно-цепная реакция для установления отцовства путем сравнения ДНК родителя и ребенка, выявления генетических аномалий и наследственной предрасположенности организма к различным заболеваниям.
Метод ПЦР (полимеразная цепная реакция) стал настоящим прорывом в области диагностики. Многие люди отмечают его высокую точность и скорость получения результатов. Особенно это важно в условиях пандемий, когда своевременное выявление инфекций играет ключевую роль. Однако не все отзывы положительные. Некоторые пациенты выражают беспокойство по поводу сложности процедуры и необходимости повторных тестов для подтверждения результатов. Также существует мнение, что стоимость анализа может быть высокой, что ограничивает доступность для некоторых слоев населения. Тем не менее, большинство согласны с тем, что ПЦР-тесты значительно улучшили диагностику и мониторинг заболеваний, позволяя врачам быстрее принимать решения и назначать лечение.
Подготовка к сдаче анализа
- Кровь рекомендуется сдавать строго натощак.
- Перед взятием мазка из уретры или цервикального канала следует в течение трех дней воздержаться от половой жизни, сдавать анализ необходимо не раньше, чем через месяц после окончания курса антибиотикотерапии, иначе результат может быть ложноположительным. Методом ПЦР выявляется ДНК даже мертвого возбудителя, поэтому проводить исследование лучше после полного обновления клеток.
- Мочу следует собирать в стерильную емкость.
Ответ чаще всего будет готов через пару дней, в зависимости от возможностей лаборатории.
Расшифровка результатов
При использовании качественной методики может быть только 2 варианта ответа: положительный или отрицательный. Положительный результат свидетельствует о наличии выделяемого микроорганизма в образце, отрицательный – об отсутствии.
Количественный результат должен оценивать лечащий врач, применяется индивидуальный подход в каждом конкретном случае. Специалист, учитывая полученный ответ, решает вопрос о необходимости лечения, дозировке препаратов, уточняет форму и стадию заболевания.
При определении генетического профиля (предрасположенности к тромбофилии, раку молочной железы) после расшифровки результата врач может оценить степень риска развития заболевания, а также назначить специальную диету, профилактические мероприятия.
Вопрос-ответ
Что такое ПЦР простыми словами?
Полимеразная цепная реакция — высокоточный метод молекулярной биологии, который позволяет обнаружить в биоматериале ДНК и РНК патогенов. Отличается чувствительностью и специфичностью, а также скоростью получения результата.
Какие инфекции показывает ПЦР?
ПЦР (полимеразная цепная реакция) используется для диагностики различных инфекций, включая вирусные (например, ВИЧ, грипп, коронавирусы), бактериальные (например, туберкулез, хламидиоз, гонорея) и грибковые инфекции (например, кандидоз). Этот метод позволяет обнаруживать генетический материал патогенов с высокой чувствительностью и специфичностью.
Что такое анализ ПЦР?
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).
-
Читайте также:
Как берут анализ ПЦР?
Анализ сдается утром натощак. При этом ряд генетических исследований проводится в произвольное время, удобное пациенту. При сдаче анализа по мазку из ротоглотки необходимо выдержать интервал с приемом пищи и воды в 3-4 часа перед тестом.
Советы
СОВЕТ №1
Перед сдачей анализа методом ПЦР убедитесь, что вы соблюдаете все рекомендации врача. Это может включать в себя отказ от приема определенных лекарств или соблюдение временного интервала после последнего контакта с инфекцией.
СОВЕТ №2
Выберите надежную лабораторию для проведения анализа. Ознакомьтесь с отзывами и аккредитацией учреждения, чтобы быть уверенными в качестве и точности результатов.
СОВЕТ №3
Не забывайте о важности подготовки к анализу. Например, для некоторых видов ПЦР-тестов может потребоваться избегать пищи или напитков за несколько часов до процедуры.
СОВЕТ №4
После получения результатов анализа обязательно проконсультируйтесь с врачом, чтобы правильно интерпретировать данные и определить дальнейшие шаги в случае положительного результата.
